现在越来越多的实验室都拥有了自动化程度比较高的分离纯化工具---快速制备色谱仪(中低压制备色谱)，常称之为过柱机或者Flash。由名字可知，这就是个替代手工过硅胶柱的工具，他所用到的柱子我们常叫它Flash柱。今天化学科讯就分享一下Flash柱分离的方法摸索的一些建议。
这里有一个进样公式，即：J =Z×0.208%×N
1）进样量用汉语拼音的J来表示；Z为硅胶装填量
2）拟将ΔRf的差值精确到0.01，那么0.01的差值设置为1个单位，用N来表示；
3）进样系数：0.208%，是基于40-60um粒径（300-400目），60A孔径的硅胶，在特定的压力条件、理想流速下，计算出的理想进样系数。考虑到实际使用过程中样品装样不平、操作误差大等因素，以0.2%代替，更接近于实际；
举个例子：80g的柱子在如下条件中可分离多少样品？
薄层数据：Rf1=0.19，Rf2=0.33
则N=（0.33-0.19）÷0.01=14
按公式计算，J=80×0.2%×14=2.24g，则，该样品依照此薄层数据，80g柱子最大进样量为2.24g。
再来一个例子算算看。
薄层数据：Rf1=0.25，Rf2=0.21，120g的柱子能分多少样品？
N=（0.25-0.21）÷0.01=4
进样量J=120×0.2%×4=0.96g
不难看出，ΔRf差值越小，进样量就越少。我们应根据目标物与杂质的分离度（ΔRf的差值）来选择使用何种规格的柱子。
该进样公式可优化为：J=Z×0.2×ΔRf，
即：进样量=硅胶量（实际克数）×0.2×Rf的差值
选好了合适的柱子，那么，该怎么设定分离方法呢？这里有一个非常经典的方法。
线性梯度法：
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初始溶剂比例=（薄层跑板的比例÷4）
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最终溶剂比例=（薄层跑板的比例×2）
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第一部分：初始比例，走1柱体积
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第二部分：从初始比例线性渐增至最终比例，走11个柱体积
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第三部分：最终比例，走2个柱体积。
如图所示
例如：跑板的溶剂系统是石油醚：乙酸乙酯=4：1，即乙酸乙酯的含量是20%，那么走线性梯度的初始溶剂比例为20%÷4=5%乙酸乙酯，走1个柱体积；然后从5%逐渐递增到20%×2，即40%，这个渐增的过程共计11个柱体积；最后以40%的比例走两个柱体积，结束，共计14个柱体积！
注意：这个方法对泵的精度要求很高，溶剂调节比例的准确度在1%以内。如biotage公司的isolera one；isco公司的RF200均可达到要求。如果您用的是国产的设备，或者精度比较差的设备（如isolera prime、RF75等），请将此方法的最终溶剂比例调节为：薄层跑板的比例×1.5，其他条件不变。
实验人员可以根据自己样品及过柱情况来增加或减少实际过柱柱体积数。
特别需要说明的是：根据薄层板数据建立的这个方法的前提条件是：爬板溶剂比例应能将目标物的Rf值落在0.1-0.4之间！！
进样量的单位是g
